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Please use this identifier to cite or link to this item: http://ntour.ntou.edu.tw:8080/ir/handle/987654321/9993

Title: 以MSH6競爭性吸附法分析小球藻DNA配對錯誤辨識蛋白
Analysis of DNA Mismatch Recognition Proteins in Chlorella pyrenoidosa by a MSH6-Dependent Competitive Binding Assay
Authors: 許濤
Contributors: NTOU:Institute of Bioscience and Biotechnology
國立臺灣海洋大學:生物科技研究所
Date: 2004-08
Issue Date: 2011-06-28T07:18:06Z
Publisher: 行政院國家科學委員會
Abstract: 摘要:DNA 錯誤配對修補系統辨識並修補起因於DNA 高重覆序列複製時聚合酵素 滑動、化學傷害或自發性鹼基變異,而辨識蛋白與單純鹼基錯誤配對或核酸環之 結合為啟動切割修補作用之關鍵步驟。本實驗室已自成熟斑馬魚中選殖到DNA 錯誤配對蛋白MSH6 之全長cDNA,並以親和性吸附法證實經體外轉錄/轉譯作用 產生之重組MSH6 對G-T 錯誤配對結合能力為正常雙股DNA 之4 倍。因DNA 錯誤配對修補系統於植物中之運作方式仍未明確,本計畫將以小球單胞藻 Chlorella pyrenoidosa 為一植物模式系統探討並分析其錯誤配對辨識蛋白。本計畫 實驗執行方式為(1)以RT-PCR 取得與哺乳類動物有57%相似度之斑馬魚MSH6 cDNA,然後以體外轉錄/轉譯作用產生帶放射性之重組蛋白, 而將小球藻蛋白質 抽取液先經陰離子交換樹酯管柱初步純化後再藉競爭性親和性吸附法探討何種 藻蛋白可競爭斑馬魚MSH6 對帶有G-T 錯誤配對寡核甘酸之結合作用,待藻類辨 識蛋白確認候以蛋白質質譜法研究其屬性。 (2)以固定化之G-T 錯誤配對寡核甘 酸直接與小球藻蛋白質抽取液反應並以固定化之正常雙股核甘酸為控制組,接著 以二維蛋白質電泳分離吸附後之藻蛋白,待以影像分析系統確認辨識蛋白後利用 蛋白質質譜法研究其屬性。本計畫預期可發現植物之DNA 錯誤配對辨識蛋白並 瞭解其特性。
Relation: NSC93-2311-B019-001
URI: http://ntour.ntou.edu.tw/ir/handle/987654321/9993
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