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Please use this identifier to cite or link to this item: http://ntour.ntou.edu.tw:8080/ir/handle/987654321/9932

Title: 小球藻G-T辨識蛋白多型性分析與受基因轉殖之影響
Polymorphisms of G-T Binding Proteins in Chlorella Pyrenoidosa and the Influence of Transgenes
Authors: 許濤
Contributors: NTOU:Institute of Bioscience and Biotechnology
國立臺灣海洋大學:生物科技研究所
Keywords: 小球單胞藻;DNA 錯誤配對;辨識蛋白;農桿菌;醣解
Date: 2006-08
Issue Date: 2011-06-28T07:17:57Z
Publisher: 行政院國家科學委員會
Abstract: 摘要:本實驗室藉親和性吸附法與二維蛋白電泳已自小球藻中分離出兩個分子量為12 至13 kDa 之G-T 錯誤配對辨識蛋白,對G-T 錯誤配對之親和力較正常DNA 強2.5 至5 倍(Hsu et al., 2005)。將一等電點約為5.5 之辨識蛋白以胰蛋白.切割後,其中之一勝.序列經 質譜法與軟體分析後發現與人類及老鼠細胞中之thymine/uracil 醣解.C 端活性區域 極為相似,故推測兩個G-T 辨識蛋白其中之一應為小球藻之G-T 辨識醣解.(Hsu et al., 2005)。由於凝膠阻礙實驗顯示小球藻蛋白可與各型DNA 錯誤配對探針結合產生多重辨 識活性,本研究將繼續分析小球藻中錯誤配對辨識蛋白之多型性。首先小球藻蛋白將藉 製備級等電點分離設備予以劃分,再藉凝膠阻礙實驗測試各分液對各型DNA 錯誤配對 探針之結合能力。為瞭解結合蛋白是否也具切割能力,本研究將使用變性凝膠電泳法檢 測醣鹼基鍵結被切割後之產物。如有醣鹼基切割產物出現則採用親和性吸附法與二維蛋 白電泳分離各醣解.配合質譜定序探討其氨基酸序列。因農桿菌感染已為一常用之植物 基因轉殖技術且已有藻類轉殖報告發表,本研究也將探討農桿菌基因轉殖對小球藻錯誤 配對辨識蛋白表現之影響。執行上將帶有左右邊界序列之pBIN19 質體轉入輔助質體之 LBA4404 農桿菌中,輔助質體產生之Vir 蛋白切割pBIN19 質體左右邊界,然後插入小 球藻基因體之DNA 序列預定以PCR 檢測,基因轉殖前後小球藻中DNA 錯誤配對辨識 蛋白之多型性差異將以上述方法分析。
Relation: NSC95-2311-B019-003
URI: http://ntour.ntou.edu.tw/ir/handle/987654321/9932
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