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Please use this identifier to cite or link to this item: http://ntour.ntou.edu.tw:8080/ir/handle/987654321/34597

Title: Tbx5基因缺損對斑馬魚(Danio rerio)胚胎時期心肌細胞增生與心管環化之影響
The expression of cardiomyocyte proliferation and heart looping on tbx5 gene knockdown zebrafish (Danio rerio) embryos
Authors: Hsin-Ping Chien
簡欣屏
Contributors: NTOU:Department of Aquaculture
國立臺灣海洋大學:水產養殖學系
Keywords: 細胞增生;環化
Date: 2013
Issue Date: 2013-10-07T02:42:56Z
Abstract: Tbx5屬於T-box家族之轉錄因子,表現於脊椎動物胚胎時期的心臟、前肢和眼睛。利用專一性反意股寡核苷酸抑制斑馬魚胚胎tbx5基因表現,會造成胚胎心臟缺損,包含心博減緩、looping產生缺損、心房心室變小等現象。使用共軛焦顯微鏡觀察發現注射tbx5-MO (Morpholino)之斑馬魚胚胎其心肌細胞數量有減少情形。透過斑馬魚DNA晶片偵測注射tbx5-MO後斑馬魚胚胎在24、30及48hpf基因表現情形,發現調控心臟肌肉增生與影響心臟環化(heart looping)相關基因表現量下降,包含心肌纖維相關因子、細胞增生與分化相關因子與影響胚胎左右不對稱發育因子、細胞週期相關因子等。利用晶片結果進行相對即時定量偵測調控心臟肌肉增生相關基因:與nkx2.5共同調控心肌纖維生長的mef2ca、位於tbx5下游調控心肌細胞增生的ndrg4、及心室肌縫隙連接的主要亞基蛋白cx43,結果顯示其表現量皆有顯著下降(p<0.05)。使用免疫螢光染色觀察心肌相關蛋白質CX43、MEF2C與MF20,結果顯示表現量均有下降趨勢;研究結果證明以斑馬魚作為研究心肌增生與心臟發育模式物種的可能性。生長賀爾蒙GH及IGF-I做用需要依靠其受體活化,進一步引發做用機制;而本研究利用相對即時定量偵測斑馬魚胚胎不同發育時期ghra、ghrb、igf1ra、igf1rb表現量,結果顯示在1細胞期便可偵測到這四個receptor表現,推測GH與IGF-I為母體轉錄因子(maternal factors)。進一步利用生長荷爾蒙GH、IGF-Ⅰ改善tbx5基因所造成缺損,結果顯示許多調控心臟細胞增生與心臟looping相關因子其表現量皆達到1.5倍上升,其中包含細胞增生、細胞分化相關因子與心肌調控因子,以及纖維母細胞生長因子;推測GH及IGF-Ι可以藉由部分增加肌肉發育及細胞週期相關基因或減少抑制細胞凋亡相關基因,部分恢復tbx5基因弱化所造成的缺損。在免疫螢光染色的實驗中,共同注射tbx5-MO與生長賀爾蒙GH、IGF-I的斑馬魚胚胎其心肌相關蛋白質MEF2C、CX43、MF20表現量皆有回復情形;綜合以上結果證明使用生長相關荷爾蒙GH、IGF-I回復tbx5基因弱化的斑馬魚胚胎是可行的。
URI: http://ethesys.lib.ntou.edu.tw/cdrfb3/record/#G0010033045
http://ntour.ntou.edu.tw/handle/987654321/34597
Appears in Collections:[水產養殖學系] 博碩士論文

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