National Taiwan Ocean University Institutional Repository:Item 987654321/34576
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Title: 點帶石斑魚對石斑神經壞死毒口服重組蛋白疫苗之免疫應答
The immune responses of orange-spotted grouper induced by oral recombinant protein vaccine against grouper nervous necrosis virus
Authors: Zi-Wen Wang
王姿文
Contributors: NTOU:Department of Aquaculture
國立臺灣海洋大學:水產養殖學系
Keywords: 口服重組蛋白疫苗;龍膽石斑神經壞死病毒;免疫應答
oral recombinant protein vaccine;Dragon grouper nervous necrosis virus;immune responses
Date: 2013
Issue Date: 2013-10-07T02:42:45Z
Abstract: 本論文擬由活體試驗的保護效果,配合抗體力價、細胞毒殺力與Class I of Major Histocompatibility Complex (MHC-I)、Cluster of differentiation 8 –α (CD 8-α)、Interleukin -6 (IL-6)、Immunoglobulin M (IgM)、Tumor necrosis factor α (TNF-α)及Interleukin -8 (IL-8)等六個免疫相關基因表現,作為魚體免疫反應分析指標,探討龍膽石斑神經壞死病毒 (Dragon Grouper Nervous Necrosis Virus, DGNNV) 口服重組蛋白疫苗,在點帶石斑魚誘發之免疫反應。首先以IPTG (Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside, IPTG) 誘導轉殖有構築抗原基因質體 (pDA 8) 之大腸桿菌 (Escherichia coli, E. coli) 大量表現並進行純化,接著透過兩階段乳化包埋的技術,將其製成DGNNV之口服重組蛋白疫苗。將本疫苗以灌食免疫 (1 μg / g-魚體重) 和混料投餵 (追加免疫) 處理點帶石斑魚苗後進行病毒攻擊試驗 (108.5 TCID50/ 25 μl/ fish),結果免疫組相對活存率達85%,顯示以DGNNV外殼蛋白製作的口服重組蛋白疫苗具良好的保護效果。以自行製備之石斑魚免疫球蛋白兔抗血清進行魚體內之抗體分析,結果免疫組魚抗體力價於第4天達到最高值,OD450 = 2.39,第七天力價微幅下降,但免疫組魚體內的抗體力價皆明顯高於控制組魚。然而利用Percoll梯度離心分離出點帶石斑魚苗周邊白血球進行細胞毒殺力分析,結果在免疫組和對照組魚都沒有測得反應。分析六個免疫相關基因在實驗魚脾臟 (spleen) 和頭腎 (head kidney) 中的表現結果,免疫組有高於對照組魚的趨勢,尤其是IL-6、MHC-I及CD-8α的表現有顯著性差異。顯示以DGNNV外殼蛋白所製作的口服重組蛋白疫苗,可以誘發免疫反應進而保護魚苗對抗神經壞死病毒的感染。
URI: http://ethesys.lib.ntou.edu.tw/cdrfb3/record/#G0019933010
http://ntour.ntou.edu.tw/handle/987654321/34576
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