English  |  正體中文  |  简体中文  |  Items with full text/Total items : 28588/40619
Visitors : 4188070      Online Users : 43
RC Version 4.0 © Powered By DSPACE, MIT. Enhanced by NTU Library IR team.
Scope Adv. Search
LoginUploadHelpAboutAdminister

Please use this identifier to cite or link to this item: http://ntour.ntou.edu.tw:8080/ir/handle/987654321/17842

Title: 從酵素動力學及結構研究探討斑馬魚 Spermidine /Spermine Acetyltransferase 1 的生理特性
Interpretation of the Physiological Characteristics of Zebrafish Spermidine / Spermine Acetyltransferase 1 by Kinetic and Structural Studies
Authors: Yi-Chin Lien
連奕欽
Contributors: NTOU:Institute of Bioscience and Biotechnology
國立臺灣海洋大學:生物科技研究所
Keywords: 斑馬魚;多胺;亞精胺/精胺 乙醯轉移酶
zebrafish;polyamine;SSAT1
Date: 2009
Issue Date: 2011-07-04
Abstract: 多胺 (polyamine, PA) 泛指腐胺 (Putrescine)、亞精胺 (Spermidine) 以及精胺 (Spermine)。這些多胺是細胞生存的必需因子並且廣泛的存在於各物種中。同時多胺參與了其他生理上的訊息調控途徑,例如脂肪代謝以及低氧誘發因子 (HIF) 皆與 PA 代謝的關鍵酵素 Spermidine/Spermine AcetylTransferase 1 (SSAT1) 有關。而目前對於 SSAT1 的研究僅止於高等脊椎動物,我們無從得知哺乳類生物是如何演化出 SSAT1 如此特殊的 PA 代謝途徑,並且產生多樣化的生理功能。因此,我們以斑馬魚為研究對象,觀察低等脊椎動物中是否有 SSAT1 的存在,同時探討哺乳類 SSAT1 的生理特性是否存在於低等脊椎動物。 首先,我們表現斑馬魚的 SSAT1 重組蛋白 (z_SSAT1),並且發展了一個新的比色活性分析方法,此分析方法能夠快速且有效率的分析 SSAT1 的酵素活性。透過此方法發現,當溫度達到 45 oC 時, z_SSAT1 活性達到最高,之後,其活性呈現戲劇性的下降。並且當環境處於較低 pH 的情況下, z_SSAT1 的活性同樣也會受到抑制。此外, z_SSAT1 比較喜歡以亞精胺做為反應基質,並且腐胺不是 z_SSAT1 的反應基質。酵素動力學的數據顯示 z_SSAT1 對於亞精胺以及精胺的 Km 值分別為 55 ± 10 μM 以及 182 ± 0.94 μM。 除了活性上的測試,我們也利用圓二色光譜針對 z_SSAT1 的結構特性進行探討。圓二色圖譜顯示 z_SSAT1 主要是由 α-螺旋所組成,並且 z_SSAT1 的結構在溫度到達 55oC 時開始崩解。而在不同 pH 環境下, z_SSAT1 的二級結構雖無太大的改變,但是從 pH 7 降到 pH 5 後,z_SSAT1 蛋白 Tm 溫度大幅度的下降 6°C。顯示酸性環境下,z_SSAT1 的蛋白結構較不穩定,此結果呼應了活性數據的變化。並且從 z_SSAT1 的分子結構模擬來看, z_SSAT1 與哺乳類動物SSAT1 的 PA 結合位有些微差異,而此差異可能就是造成基質選擇變化的原因。 此外,因為 SSAT1 為 PA 代謝中的關鍵酵素,細胞會從不同層面上針對 SSAT1 進行調控。我們想知道在斑馬魚細胞中,SSAT1 是否也受到 PA 的調控。實驗結果發現斑馬魚 ZF4 細胞中的 z_SSAT1 會受到 PA 類似物 DENSPM 的誘導。 綜合以上結果,我們透過酵素動力以及結構分析指出 z_SSAT1 的酵素特徵。並且透過 DENSPM 能夠誘導 z_SSAT1 表現,我們認為 SSAT1 能調控 PA 在斑馬魚內的濃度。雖然我們還不清楚斑馬魚與哺乳類 SSAT1間的差異是否反應了不同的生理需求,但我們的實驗結果已經為相關的研究開創了一扇窗。
URI: http://ethesys.lib.ntou.edu.tw/cdrfb3/record/#G0M96360024
http://ntour.ntou.edu.tw/ir/handle/987654321/17842
Appears in Collections:[生命科學暨生物科技學系] 博碩士論文

Files in This Item:

File Description SizeFormat
index.html0KbHTML176View/Open


All items in NTOUR are protected by copyright, with all rights reserved.

 


著作權政策宣告: 本網站之內容為國立臺灣海洋大學所收錄之機構典藏,無償提供學術研究與公眾教育等公益性使用,請合理使用本網站之內容,以尊重著作權人之權益。
網站維護: 海大圖資處 圖書系統組
DSpace Software Copyright © 2002-2004  MIT &  Hewlett-Packard  /   Enhanced by   NTU Library IR team Copyright ©   - Feedback