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Please use this identifier to cite or link to this item: http://ntour.ntou.edu.tw:8080/ir/handle/987654321/15984

Title: 利用大腸桿菌宿主系統表現綠豆澱粉磷解酶基因之重組蛋白質
Expression of mungbean (Vigna radiata L.) starch phosphorylase recombinant protein in E. coli system
Authors: Jyun-Jheng Wang
王鈞正
Contributors: NTOU:Department of Food Science
國立臺灣海洋大學:食品科學系
Keywords: 澱粉磷解酶;大腸桿菌;重組蛋白質
starch phosphorylase;E. coli;recombinant protein
Date: 2010
Issue Date: 2011-06-30T08:26:58Z
Abstract: 澱粉磷解酶(starch phosphorylase, SP;EC 2.4.1.1)為高等植物澱粉代謝酵素之一。先前已獲得綠豆 (Vigna radiata L.) SP之原生型全長cDNA (Vrsp-wt, 2961bp, GenBank GQ465004);本研究目的是將Vrsp-wt選殖到以大腸桿菌為宿主的表現載體並表現出重組蛋白。實驗方法為將兩端含 EcoRI 與 SalI 限制酶切位的Vrsp-wt,接入 pMAL-c2X 載體,再轉型至 JM 109 選殖宿主;結果發現只接入 1500 bp 長度的原生型重組質體,推測是受 Vrsp-wt 本身序列影響,使其重組質體在宿主複製時產生斷裂或重組現象;因此設計修飾型的Vrsp (Vrsp-modify),兩端為含有 SalI 與 BamHI 的切位接入;所獲正株系之重組質體大小約為10 kb,利用Vrsp-modify 序列的引子以PCR、限制酶切割與內部序列確認,已成功建立含有重組載體 pMAL-c2X-Vrsp-modify 的株系。在重組蛋白質的誘導方面,以BL21(DE3) 為表現宿主,當誘導溫度37℃、6小時、IPTG 濃度為0.6 mM,觀察到誘導出之蛋白質分子大小為 54 kDa 之可溶性未知蛋白質,但比預估為157 kDa之 rVrSP 重組蛋白質小;此 54 kDa 蛋白質待進一步的身份鑑定,西方墨點等實驗來確定是否為一部分的rVrSP 重組蛋白質,以及再試誘導條件,或需更換表現宿主來得到預期分子量蛋白質。
URI: http://ethesys.lib.ntou.edu.tw/cdrfb3/record/#G0M97320060
http://ntour.ntou.edu.tw/ir/handle/987654321/15984
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